产品货号：
YT120
中文名称：
细胞凋亡DNA断裂片段提取试剂盒
英文名称：
DNA fragmentation Extraction Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提最小片段为180～200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。
DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
保存：-20℃。
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DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
| 组分 | 规格 |
| 样品裂解液 | 30mL |
| 蛋白酶K | 130μL |
| 10M醋酸铵 | 6mL |
| TE | 6mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：-20℃。
- 需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 样品收集
- 对于组织样品：
切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。或直接冰浴上匀浆。 - 对于贴壁细胞：
胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000～2000g离心1～2分钟，弃上清，收集细胞。 - 对于悬浮细胞：
1000～2000g离心1～2分钟，弃上清，收集细胞。
- 对于组织样品：
- DNA ladder抽提
- 每1mL 样品裂解液中加入5μL 蛋白酶K，混匀。
- 对于上述收集好的样品，每5mg 组织或者106个细胞中加入500μL 添加了蛋白酶K的样品裂解液，Vortex混匀，充分裂解组织或细胞。
- 50℃水浴消化过夜(通常12～20小时皆可)。
- 加入500μL Tris平衡苯酚(pH8.0)。
- Vortex剧烈混匀，使有机相和水相充分混合，以达到抽提效果。4℃，12000g离心5分钟。
- 缓慢吸出上层水相至另一洁净离心管中。注意勿触及中间层，中间层通常含有变性的蛋白等，并用等体积Tris平衡酚再抽提一次(同步骤e)。
- 缓慢吸出上层水相至另一洁净离心管中。注意勿触及中间层，中间层通常含有变性的蛋白等，并用等体积氯仿再抽提一次(同步骤e)。
- 慢慢吸出约300μL 上清液，加入60μL 10M醋酸铵和600μL 无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。-20℃冻存1小时，以充分沉淀小片段DNA。冻存过夜或-70℃冻存效果更佳。
- 4℃，12000g离心10分钟，弃上清。
- 加入600μL 70%乙醇，轻轻颠倒约2次。4℃，12000g离心10分钟，小心吸去上清。
注意：70%乙醇洗涤的时候，千万注意避免损失一些细小的DNA沉淀，这些沉淀中大部分是你所需的DNA ladder。 - 尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100μL TE溶解DNA。
注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。 - 取部分抽提得到的DNA，1%琼脂糖凝胶电泳分析。如果细胞发生凋亡，就可以观察到典型的DNA ladder。电泳时一定要注意换用新鲜配制的电泳液，DNA凝胶也要用新鲜配制的电泳液配制并新鲜配制后使用。电泳时为获取最佳的电泳效果使ladder充分分开，电泳速度宜适当慢一些，凝胶宜适当长一些，而加样孔宜更加扁平一些。选取适当较薄的梳齿，往往会获得更好的ladder电泳效果。
- 每1mL 样品裂解液中加入5μL 蛋白酶K，混匀。
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